Kandungan
Teknik elektroforesis memisahkan molekul DNA berdasarkan saiznya; Teknik yang serupa untuk protein boleh memisahkannya berdasarkan ukuran atau caj. Dalam kedua-dua kes, gel yang mana migrasi molekul disediakan menggunakan larutan penampan, suatu bahan kimia yang bertindak untuk menstabilkan pH. Cap ini memenuhi beberapa peranan penting dalam elektroforesis.
Semasa
Gel elektroforesis berfungsi dengan menggunakan arus elektrik ke plat gel yang terendam dalam penampan. Molekul DNA dikenakan secara negatif, dan protein boleh dikenakan secara negatif dengan menudingnya terlebih dahulu dan kemudian merawatnya dengan sodium dodecyl sulfate (SDS). Protein atau molekul DNA berpindah dari katod negatif yang dikenakan ke anod yang dikenakan positif. Walau bagaimanapun, air adalah kenderaan yang agak lemah semasa - ia hanya membawa semasa berkesan apabila ia melarutkan bahan-bahan di dalamnya, kerana ion yang dikenakan bergerak di medan elektrik. Penyelesaian penampan mempunyai kepekatan ion yang lebih tinggi (kekuatan ionik yang lebih tinggi), sehingga dapat membawa lebih banyak arus dari air tulen.
Perubahan PH
PH mengukur kepekatan ion hidrogen. Perubahan dalam pH boleh mengubah cas bersih molekul, seperti protein atau DNA, menyebabkan penghijrahan yang lebih perlahan (atau lebih cepat). Itu kerana molekul ini mempunyai bahagian asas yang menerima ion hidrogen (proton) dan banyak bahagian asidik yang boleh menyumbangkan proton. Apabila asid menyumbang proton, ia akan dikenakan caj negatif; apabila asas menerima proton, sebaliknya, ia akan dikenakan caj positif. Oleh kerana kepekatan ion hidrogen dalam larutan meningkat, protein dan DNA menjadi kurang negatif (atau lebih positif dikenakan). PH di mana molekul, seperti protein, tidak mempunyai caj dipanggil titik isoelektrik. Buffer menstabilkan pH dalam gel pada tahap di mana DNA akan dikenakan secara negatif dan akan berhijrah seperti yang diinginkan.
Gel menyusun
Buffers memainkan peranan yang lebih kompleks dalam sejenis elektroforesis yang dipanggil SDS-PAGE, atau natrium dodekil sulfat, elektroforesis gel polyacrylamide. Ini adalah salah satu teknik yang paling biasa untuk analisis protein. Mereka disifatkan oleh rawatan haba dan kemudian disalut dengan sodium dodecyl sulfate, dan hanya kemudian ditambahkan ke gel, yang biasanya berjalan secara menegak. Gel mempunyai dua wilayah, satu daripada susunan (di bahagian yang lebih tinggi) dan satu di bahagian bawahnya. Gel penyusun disediakan dengan penampan yang berbeza supaya pHnya lebih rendah daripada gel berlari, lebih-lebih lagi, ia mempunyai kekuatan ionik yang lebih kecil. Kedua-dua faktor ini menyebabkan susunan protein, jadi ia berjalan dalam gel yang berjalan pada masa yang sama. Kesan ini membantu memastikan pemisahan protein dalam gel mengikut saiznya.
Cap DNA elektroforesis
Kedua-dua penampan yang paling biasa untuk elektroforesis gel DNA adalah tris-asetat EDTA dan tris-borat EDTA, di mana EDTA bermaksud asid etilenediaminetetraacetic. Ia penting kerana ia berfungsi sebagai chelator untuk ion magnesium, mengeluarkannya daripada penyelesaiannya. Ion-ion ini adalah kofaktor penting bagi enzim yang dipanggil DNA yang memecahkan DNA, jadi EDTA dalam penampan berfungsi sebagai langkah berjaga-jaga tambahan untuk mencegah sebarang masalah dengan DNA.