Kandungan
Elektroforesis gel agarose adalah prosedur saintifik yang digunakan dalam penyelidikan dan projek diagnostik yang melibatkan kajian asid nukleik. Ia membolehkan saintis atau juruteknik untuk memisahkan molekul asid nukleus yang dikenakan, seperti DNA, mengikut saiznya, dan digunakan untuk menganalisis produk yang dihasilkan oleh eksperimen, seperti reaksi rantai polimerase. Ia digunakan secara rutin kerana ia murah untuk dijalankan, proses cepat dan membolehkan pemulihan asid nukleus dianalisis.
Membuat gel
Kumpulkan semua barang yang perlu dan bersihkan dengan etanol 70%. Item termasuk dulang cast gel, pita pelekat, agarose kelas, labu atau silinder gred, kepekatan 10x (Tris-Borate-EDTA, TBE) penampan, etida bromida, pewarna, dan sampel yang akan dianalisis. Juga pastikan anda mempunyai takungan elektroforesis gel dan sumber kuasa. Agarose disediakan dengan menimbang jumlah pita DNA yang sesuai untuk dianalisis, mencampurkan dengan penampan TBE dan lebur dalam gelombang mikro. Pada amnya, penyelesaian 1% hingga 2% cukup untuk menampung banyak helai DNA yang dikaji dalam biologi molekul harian. DNA kecil memerlukan lebih banyak gel yang tertumpu, manakala yang lebih besar memerlukan gel yang lebih banyak dicairkan. Larutan agarose dicampurkan dengan etidium bromida, yang akan mengikat asid nukleik semasa prosedur elektroforesis. Penyelesaian ini dicurahkan ke dalam dulang yang mencairkan gel, sama seperti sikat acuan dimasukkan, dan campurannya ditinggalkan untuk menguatkan.
Masukkan dan aktifkan gel
Gel dikeluarkan dari dulang dan tenggelam dalam gelung elektroforesis gel yang mengandungi penampan larian. Sampel yang akan dianalisis bercampur dengan pewarna dan dimasukkan ke dalam telaga dalam gel yang dibuat oleh sikat. Penanda atau skala juga termasuk untuk membolehkan penyiasat melihat kemajuan elektroforesis dan menentukan saiz serpihan yang dihasilkan. Arus elektrik kemudiannya digunakan untuk gel, yang memaksa sampel untuk berhijrah dari satu ujung gel ke yang lain. Semasa proses ini, asid nukleik dalam sampel itu berasingan kepada serpihan saiz yang berlainan, dengan molekul yang lebih besar semakin dekat dengan telaga, dan molekul yang lebih kecil bergerak ke ujung gel yang lain.
Menganalisis gel
Selepas menamatkan prosedur elektroforesis, gel dikeluarkan dari takungan dan diletakkan di transilluminator UV, yang menerangi serpihan asid nukleik yang mengikat dengan etida bromida fluoresen. Gambar ini dilakukan dan kumpulan asid nukleik dapat diukur mengikut jarak yang berpindah melalui gel. Skala ini akan memisahkan mereka ke dalam kumpulan saiz yang diketahui, dan boleh digunakan untuk membimbing penyelidik semasa analisis.