Cara membuat gel agarose

Video.: Pembuatan gel agarose (agarose gel preparation)

Kandungan

Arahan
Penyediaan gel agarose
Notis
Apa yang anda perlukan

Gel agarose dibuat oleh saintis yang bekerja di makmal biologi molekular untuk mengkaji serpihan DNA yang diubah suai semasa kerja eksperimen. Teknik membuat gel agarose adalah kemahiran rutin yang mesti dikuasai oleh semua penyelidik kerana ia membolehkan visualisasi langsung dari pelbagai saiz DNA untuk projek pengesahan dan gen pengklonan. Walaupun penyediaan gel tidak sukar, seperti semua prosedur makmal, ia hanya perlu diuji oleh seorang profesional yang dilatih secara saintifik kerana risiko biologi yang terlibat.

Arahan

Cara membuat gel agarose (Imej Comstock / Comstock / Getty Images)

Penyediaan gel agarose

Pastikan asas gel tidak mempunyai keretakan atau apa-apa yang boleh menyebabkan agarose panas bocor. Dulang bersih dengan alkohol 70% dan biarkan kering sepenuhnya. Pangkalan mempunyai dua hujung terbuka dan dua hujung tertutup. Dalam beberapa format, klip disediakan dengannya untuk menutup hujung, tetapi kebanyakannya mesti dimeteraikan dengan meletakkan jalur pita antara bahagian terbuka. Tekan pita dengan tegas dan selamat, kerana ia boleh bergerak dari pemegang dan membenarkan agarose panas bocor.
Berdasarkan saiz serpihan DNA yang akan dipisahkan dan dianalisis pada gel agarose, tentukan peratusan yang sesuai yang diperlukan. Contohnya, pada 1% (w / v), gel agarose berkesan untuk analisis segmen DNA 0.5 hingga 10 kb. Lebih tinggi peratusan (lebih banyak agarose), semakin kecil serpihan yang boleh dipisahkan. Eksperimen rutin menggunakan pelbagai 0.5% hingga 2% agarose. Untuk gel agarose 1%, timbang 1 g serbuk agarosa dalam pakaian kimia atau sistem pembendungan yang lain. Pindahkan dengan teliti ke kawasan penyediaan makmal gel.
Dalam kawasan penyediaan gel yang sesuai, ukur 100 ml penyangga elektroforesis. Ia harus pada suhu bilik. Pindahkan serbuk agarosa ke dalam balang tahan api dan tuangkan jumlah pengukur elektroforesis diukur. Perlahan-lahan memanaskan campuran dalam ketuhar gelombang mikro, tetapi jangan rebus, kerana penyejatan boleh mengubah peratusan agarose hadir. Pastikan semua agarose dibubarkan, goncangkan dengan teliti campuran, biarkan sejuk sedikit dan kemudian tambah 0.5 mikrogram per mililiter bromida etidium. Jangan menghirup sebarang wap kerana ini boleh merengsakan paru-paru dan tisu mukosa. Juga, jangan panaskan larutan selepas etidium bromida telah ditambah. Goncang lagi untuk dicampur, dan kemudian ketika larutan masih cukup panas untuk tumpah, larapkannya ke dalam dasar yang disediakan. Ambil perhatian bahawa jika jumlah sampel yang besar atau kepekatan kecil DNA hadir, gel tebal boleh dibuat. Walau bagaimanapun, gel yang lebih baik adalah lebih mudah untuk menganalisis kerana mereka akan lebih jelas gambar.
Masukkan sikat ke dalam gel untuk membuat alur atau telaga untuk sampel yang akan diletakkan. Biarkan ia sejuk ke suhu bilik selama beberapa jam atau di dalam peti sejuk selama beberapa minit. Dalam kes terakhir, sebaik sahaja gel sudah siap, kehadiran kristal agarosa perlu diperhatikan. Umumnya, mereka hilang jika gel dibenarkan untuk memanaskan suhu bilik di meja atas selama beberapa minit sebelum digunakan. Berhati-hati mengeluarkan sikat supaya tidak merobek gel atau memecahkan telaga. Gel agarose kini sedia untuk digunakan. Sekiranya tidak digunakan dengan serta-merta, ia perlu dibungkus dengan selofan atau disimpan dalam bekas plastik di dalam peti sejuk untuk menghalangnya daripada mengering atau mencair.

Notis

Reagen yang digunakan adalah karsinogen dan boleh dikendalikan dengan penjagaan dan perlindungan yang mencukupi. Jika kesilapan dilakukan semasa penyediaan gel, ia tidak boleh dipanaskan semula, tetapi dihapuskan dan gel baru disediakan semula.