Kandungan
Tuberkulosis adalah penyakit berjangkit yang disebabkan oleh bakteria Mycobacterium tuberculosis dan merupakan penyakit pernafasan yang dicirikan oleh pembentukan umbi, nekrosis, abses, fibrosis dan kalsifikasi pada paru-paru. Ia juga boleh menjangkiti buah pinggang, kelenjar getah bening, tulang, sendi dan kulit.
Diagnosis makmal utama bacillus ini melibatkan pewarnaan untuk menggambarkan bakteria di bawah mikroskop. Sampel pilihan adalah lavage sputum atau bronchoalveolar untuk mengenal pasti jangkitan pernafasan atau sampel tisu sebenar.
Fisiologi
Mycobacterium tuberculosis adalah organisma berbentuk batang (bacilli), spora yang tidak bergerak, tidak wajib. Bakteria ini berukuran 0,4x3 mikrometer panjang dan mengalami pembelahan binari (pembelahan sel pembiakan) setiap 15 hingga 24 jam, yang dianggap lambat berbanding dengan bakteria lain. Oleh kerana itu, mycobacterium memerlukan masa sehingga sembilan minggu untuk muncul dalam media kultur.
Organisma ini sensitif terhadap cahaya UV dan haba (seperti pasteurisasi), tetapi menentang disinfektan kimia.
Noda Gram
Mycobacterium tuberculosis tidak dapat diklasifikasikan sebagai gram positif atau gram negatif. Klasifikasi ini dibuat berdasarkan jumlah peptidoglikan di dinding sel bakteria. Spesies gram positif mempunyai lapisan tebal molekul ini (kira-kira 90%), sementara spesies gram-negatif mempunyai lapisan tipis (dari 5% hingga 20%). Noda gram menembusi dinding sel dan mengikat komponen kimia di dalamnya. Di bawah mikroskop, bakteria yang berwarna akan berubah menjadi ungu atau merah jambu.
Dengan mycobacterium tuberculosis, dinding sel terdiri daripada peptidoglycan, tetapi juga lipid kompleks yang menghalang penembusan pewarna gram. Dinding sel juga menentang perubahan warna oleh asid atau alkohol, sebab itulah mycobacterium disebut "tahan asid". Lipid dinding sel adalah asid mikolik, faktor tali dan D-lilin. Sekiranya bakteria diwarnai, sel akan tampak positif gram atau sedikit pucat dengan warna yang sangat sedikit.
Untuk melihat bakteria, noda khas, seperti noda Aumarine atau Zhiel-Neelson, mesti digunakan.
Noda Aumarine-rhodamine
Proses menggunakan auramine-rhodamine menggunakan pewarna pendarfluor kuning untuk memvisualisasikan mycobacterium tuberculosis di bawah mikroskop pendarfluor. Kalium permanganat atau oren acridine boleh digunakan sebagai pewarna kontras. Di bawah lensa, sel bakteria akan kelihatan hijau.
Pewarna auramine-rhodamine lebih sensitif daripada Zhiel-Neelson dan lebih berkesan dari segi ekonomi.
Pewarna Ziehl-Neelson
Noda Ziehl-Neelson diciptakan oleh saintis Franz Ziehl dan Friedrich Neelsen, dan menggunakan karbol-fuchsin yang dipanaskan, kepekatan asid-alkohol tinggi dan pewarna kontras, seperti malachite hijau atau biru metilena. Di bawah mikroskop pendarfluor, sel bakteria akan kelihatan merah jambu terang.
Pewarna Ziehl-Neelson adalah standard kecemerlangan untuk mengenal pasti awal mycobacterium tuberculosis dan mycobacterium leprae.
Agar
Sebagai tambahan kepada pengenalan mikroskopi, mycobacterium tuberculosis mesti ditanam pada kultur agar khas. Lowenstein-Jensen gelatin mempunyai bahan organik yang kompleks (seperti telur dan kentang), garam, gliserol dan malachite hijau (yang menghalang bakteria lain). Antibiotik boleh ditambahkan untuk menghalang mikroorganisma yang mencemarkan. Sampel diletakkan di atas agar ini, dan bakteria tumbuh dalam tiga hingga sembilan minggu.
Penyelesaian kultur nutrien, seperti albumin dan biotin, dapat digunakan untuk mendukung pertumbuhan bahkan bakteria sasaran yang terkecil. Ini dikenali sebagai Middlebrook 7H9 (atau 7H12).
Di kedua-dua media, koloni akan kelihatan seperti koloni kecil, coklat terang, terang.
Dengan teknologi canggih, mycobacterium tuberculosis kini dapat ditanam menggunakan pembaca automatik. Larutan cair medium Middlebrook 7H9 dan sebatian penunjuk pendarfluor digunakan untuk memantau pertumbuhan dan melaporkan jangkitan positif atau negatif.